ADN polymérases

On distingue les transcriptases inverses, les ADN polymérases ADN dépendantes et la Terminal désoxynucléotidyl Transférase (TdT)

Transcriptases inverses (réverse transcriptase)

Définition, Origine

ADN polymérase ARN/ADN dépendant

Codées par le gène Pol des rétrovirus (ex : HIV). Les plus utilisées sont purifiées à partir de cellules infectées par l'AMV (virus de myéloblastose aviaire) ou le MMLV (virus leucémique murin de Moloney).

Depuis peu, reverse transcriptase thermorésistante disponible

Activité

A partir d'une amorce, convertir l'ARN en ADN double brin (activité polymérase 5'-3'). Pas d'activité exonucléase 3'-5'(relecture). Schéma

+RNAase H : dégradation de l'ARN dans les hybrides ADN-ARN.

Utilisation

• Séquençage de l'ADN, ARN.
• Construction de banques d'ADNc.
• PCR.
• Extension d'amorce

---

ADN polymérases ADN dépendantes

Définition, Origine

ADN polymérase I d'E. coli

ADN polymérase du phage T4

Taq polymérase isolée de Thermus aquaticus

Vent polymérase isolée de Thermococcus litoralis

Fragment de Klenow : fragment de l'ADN pol.I. Souvent préféré à l'enzyme entière(sauf pour les techniques de translation-coupure) car ne possède pas d'activité exonucléase 5'-3' risquant de dégrader l'ADN néosynthétisé.

Activité
 

ADN pol.I et T4 : polymérase 5'-3' à partir d'une amorce + exonucléase 5'-3' (celle de T4 est 100 fois plus efficace).

Tap pol. :idem ci-dessus mais température polymérisation à 72°C, stable à 95°C.

Vent pol. : idem Taq + activité de relecture.

Utilisation

Séquençage de l'ADN.

Réalisation de sonde.

Amplification par PCR(Taq, Vent).

---

Terminal désoxynucléotidyl Transférase (TdT)

Activité

Addition de désoxynucléotides à l'extrémité 3'OH de fragments d'ADN. Schéma

Utilisation

Réalisation de sonde

Clonage (banque d'ADNc)

Anchored-PCR.